CAT、MDA、PX测定的一些问题？

发布时间：2014/2/8 9:26:11　浏览次数：9813　[字号：大 中 小]　 [关闭此页　打印此页]

今天做预试的过程中遇到一些问题，想请教：

1，CAT试剂盒  样品为大鼠脑组织10%匀浆液，我先后测定了0.5%、1%、2%、10%的匀浆液浓度，由于我们没有0.5cm光径的测定杯，所以都用的1cm光径的，测定管和对照管的OD值始终都在1.1-1.2，随浓度差变化不大，反应液颜色呈淡黄色。

我想请问，如果使用1cm光径测定，需要做何调整不？还是一定要用0.5cm光径的。另外，我的样品里是否自身含有较高的过氧化氢，所以导致测定和对照管差值微弱？（如0.5%匀浆液 对照1.136  测定1.135；1%匀浆液 对照1.152 测定1.147）

2，MDA微量试剂盒  由于我们之前用过普通的MDA试剂盒，测定值不理想，所以这次订购的微量法。10%脑匀浆液200ul加入反应，全按照说明书操作，读值测定管0.923 对照管0.265，这样的值是否超过该方法的线性范围？

3，血清铁试剂盒  遇到的问题与CAT类似，我还是以 1cm光径测定，而非说明书的0.5cm光径，读值 空白管-0.009 ，标准 0.081，测定 0.163，请问是否在线性范围内？可否这样操作。

4，GSH-Px试剂盒中 GSH仅2只粉剂（50T），并要求现用现配，具体实验操作中无法1次或2次就用完该kit，那该试剂如果配成溶液后4度保存，对测定结果有何影响？或者可以-20度冻存保存溶液？

回复：

CAT在脑组织中表达很低，不需要做浓度摸索，直接用10%匀浆操作，样本量够的话可以取0.1ml进行测定；1cm光径测定的话，吸光度肯定在1.0以上，但由于计算所用的是一个系数（271），所以需要将1cm测得的吸光度代入公式计算所得结果再除以2！

MDA测定脑组织用普通的MDA很多，并不影响测定结果。并且MDA测定的是具体含量，单从老师的测定吸光度来看有点高，可以取100微升操作！

血清铁用1cm光径不影响，只要我们的反应体系加入到您的1cm光径的比色皿中，您可以正常比色即可！您的吸光度没有问题！但是空白吸光度不应该是负值，用蒸馏水调零，出现负值应该是2个比色皿之间差异导致！

GSH-PX（50T），GSH粉剂只有2支，老师操作的间隔时间有多长？如果是分批采样的话，一般我们都建议收集样本后一起进行测定；配制好的1mmol/L的GSH，4℃冷藏一周没有问题！

测定GST样本怎么处理？

大鼠或者小鼠的大脑皮质T-SOD,CAT,GSH参考值？