细胞做AKP怎么处理？

发布时间：2014/2/8 9:25:33　浏览次数：3817　[字号：大 中 小]　 [关闭此页　打印此页]

购买了贵单位的AKP活性检测试剂盒，货号是JC-A0059.

我打算检测96孔板贴壁细胞中不同药物处理后AKP活性的变化，看了一下说明书，有些地方不明白：

1.细胞裂解液用的是什么：说明书举例用的是“0.2毫升的1%Trition加入12孔板",但不知道要处理细胞多长时间呢？96孔板大概需要加多少呢？

2.举例中提到要用BCA法测定蛋白浓度，我不太清楚，做贴壁细胞AKP活性检测都需要检测蛋白浓度吗？

这里的蛋白浓度是用Triton裂解细胞后获得的蛋白裂解液检测的吗？是否每个孔都需要检测蛋白？

恳请尽快解答，谢谢！！我的联系电话是13798040097  杜宇

回复：

1、用TritonX-100裂解细胞，测定AKP活性，我们建议4℃裂解，但是一般所需时间会比较长，至少需要2小时左右，但很多老师提到时间不够，需要4℃裂解过夜！（关于细胞破碎的程度，最好用显微镜观察确定）

96孔板容量较少，裂解液只需要覆盖满细胞就可以了，所以96孔板加30-50微升就可以了！

2、测定细胞的AKP活性，需要破碎细胞，考虑到每一孔的细胞量的差异，所以破碎细胞后我们都会同时检测其中的总蛋白浓度！用于结果计算并校正细胞数量的差异！也就是用TritonX-100裂解细胞后一部分用于AKP的测定；一部分用于总蛋白的定量！

当然也有老师不考虑细胞量的问题，直接按孔来表示并比较结果，不测定蛋白！

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