贴壁细胞样品如何制备的问题

发布时间：2014/2/8 9:02:19　浏览次数：3395　[字号：大 中 小]　 [关闭此页　打印此页]

因为在你们这里HK,G6PD,LDH,GSH,PK的酶活性检测试剂盒，想了解一下关于贴壁细胞样品如何制备的问题，和我们这里只有1.0cm光径的比色皿，用1.0和0.5的区别在哪里。下面是我的蛋白样品制备的方法，看是不是需要改进，谢谢。

回复:

体外培养细胞用超声裂解后用于相关酶活性检测，是可以的！从您需要检测的指标中，HK、PK、LDH、GSH测定细胞内我们都做过，没有问题。

操作流程：贴壁培养的细胞，去掉培养液后，PBS洗1-2次，胰酶消化，终止后用移液器轻轻吸打，然后转入EP管，低速离心弃上清，再用PBS洗一次细胞，离心弃上清留沉淀细胞，如果暂时不做，将沉淀细胞低温冻存！

测定之前，根据指标，加入一定量的缓冲液（PBS或者生理盐水），将细胞悬浮，超声破碎，破碎后不需离心，直接混匀充分后用于不同指标的测定。但是细胞一旦破碎，相关指标尽快完成，不可存放！

HK、PK我们是用0.5cm光径石英比色皿进行测定的，由于我们的反应体系只有1ml多一点，普通1cm光径的比色皿不够比色！

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